实时荧光PCR技术

　　本书系统阐述了实时荧光PCR技术的基础理论和临床检测方法，共25章。包括实时荧光PCR技术的基本原理和方法，PCR实验室设计与质量管理，检验标本的采集、运送、保存及核酸提取，PCR测定数据处理，PCR检验仪器设备，检验质量保证，病毒核酸检测的标准物质，以及各型肝炎病毒、人免疫缺陷病毒、人乳头瘤病毒、巨细胞病毒、冠状病毒、EB病毒、流感病毒、沙眼衣原体、结核杆菌、淋病奈瑟菌、幽门螺杆菌、肺炎支原体、刚地弓形虫、解脲支原体等实时荧光PCR检测的标本采集与处理、引物和探针设计及临床意义。本书资料翔实、新颖，实用性、指导性强，是从事临床疫病研究、诊治的重要参考书。

章临床pcr技术的发展历史及趋势(1)
节pcr的起源和耐热dna聚合酶的应用(1)
一、pcr的起源(1)
二、耐热dna聚合酶的应用(2)
第二节pcr的基本(3)
第三节pcr的反应动力学(5)
第四节pcr的扩增体系和扩增条件(5)
一、pcr扩增体系的基本要素(5)
二、pcr的标准扩增体系(8)
三、pcr扩增的增强剂(9)
四、降落pcr(9)
五、热启动pcr(10)
六、coldgpcr(10)
七、pcr扩增结果分析(11)
第五节pcr的特点(12)
一、高特异(12)
二、高灵敏度(12)
三、简便快速(12)
四、特定的低纯度标本也可使用(12)
第六节pcr的发展(12)
参文献(13)
第2章实时荧光pcr技术的基本和方法(14)
节发展历程(14)
第二节基本(15)
一、pcr扩增的理论模式(15)
二、实时荧光pcr的理论基础(16)
三、taqman实时荧光pcr的基本(17)
四、双链dna交联荧光染料实时荧光pcr的基本(19)
五、双杂交探针实时荧光pcr的基本(20)
六、分子信标实时荧光pcr的基本(20)
七、蝎形探针实时荧光pcr的基本(21)
八、数字实时荧光pcr的基本(24)
第三节引物、探针的特点及设计软件(26)
一、引物的特点(26)
二、探针的特点(26)
三、引物和探针设计软件(27)
第四节多重实时荧光pcr(28)
参文献(28)
第3章临床pcr实验室的设计及质量管理体系的建立(30)
节实验室的分区规划设计(30)
一、标本的接收(30)
二、实验室分区设计的一般原则及工作流程(31)
第二节实验室质量管理体系的建立(39)
一、实验室质量管理概述(39)
二、实验室质量管理的特点(41)
三、质量体系文件的编写(42)
第三节实验室的记录管理(56)
一、记录的种类(56)
二、记录的标识(56)
三、记录的填写(57)
四、记录的封面和(59)
五、记录的良好保存(59)
六、记录的保存期限(59)
七、过期记录的处理(59)
八、记录表格样式的持续改进(59)
九、电子记录的管理(60)
第四节实验室验收与实验室认可(60)
一、实验室认可的由来及目的(60)
二、实验室认可与认证的区别(61)
三、实验室验收与实验室认可的关系(61)
参文献(62)
第4章临床pcr检验标本的采集、运送、保存及核酸提取(63)
节标本采集、运送、保存(63)
一、标本采集(63)
二、标本运送(65)
三、标本保存(65)
第二节常见临床标本的处理和保存(66)
一、血清(浆)样本(66)
二、全血样本(66)
三、外周血单个核细胞(66)
四、痰(66)
五、棉拭子(67)
六、脓液(67)
七、体液(68)
八、乳汁(68)
九、组织(69)
第三节临床标本中pcr抑制物(70)
一、临床标本中pcr抑制物的来源及作用机制(70)
二、几种常见抑制物的作用机制及对策(70)
第四节核酸的提取方法(72)
一、dna提取的经典方法(72)
二、rna的提取(73)
三、核酸提取的改良方法(74)
参文献(78)
第5章实时荧光pcr测定的数据处理(83)
节基本概念(83)
第二节实时荧光pcr外标保证定量的数学模型(85)
一、基本计算公式的推导(85)
二、纵坐标为起始拷贝数对数值横坐标为ct时的数学模型(85)
三、纵坐标为ct横坐标为起始拷贝数时的数学模型(86)
第三节实时荧光pcr相对定量的数学模型(87)
一、相对定量的标准曲线法(87)
二、2-δδct法(89)
三、2-δδct的改良方法(89)
四、多重pcr法(91)
第四节用曲线拟合的方法进行数据处理(92)
一、liu与saint的方法(92)
二、ramakers等的方法(92)
三、tichopad等的方法(92)
参文献(93)
第6章实时荧光pcr仪及其发展(94)
节pcr仪的发展历史及基本(94)
一、空气驱动循环pcr仪(94)
二、变温金属块pcr仪(95)
第二节实时荧光pcr仪简介(95)
一、美国abi公司生产的实时荧光pcr仪(95)
二、美国cepheid公司的smartcycler实时荧光pcr仪(98)
三、美国biograd公司的实时荧光pcr仪(99)
四、美国stratagene公司的实时荧光pcr仪(100)
五、roche公司的lightcycler实时荧光pcr仪(101)
六、corbert的rotorgene实时荧光pcr仪(103)
七、eppendorf公司的mastercyclereprealplex实时荧光pcr仪(104)
第三节实时荧光pcr仪选择(104)
一、仪器使用的广泛程度(104)
二、工作量(104)
三、耗材的开放(105)
四、硬件设计特点(105)
五、检测通道和可检测的荧光染料(105)
六、温度梯度功能(105)
七、软件功能(105)
第四节数字pcr仪简介(106)
一、微流控芯片数字pcr(107)
二、液滴数字pcr(107)
第五节实时荧光pcr仪的使用、维护和校准(108)
一、实时荧光pcr仪使用中的注意事项(108)
二、维护和校准(108)
参文献(111)
第7章临床pcr检验仪器设备的使用、维护和校准(112)
节天(112)
一、电子分析天及其分类(112)
二、天的正确使用(113)
三、天的选择(114)
四、天的维护和校准(114)
第二节离心机(115)
一、离心机离心的基本(115)
二、离心力和相对离心力(116)
三、离心时间(116)
四、离心转子的选择(119)
五、离心管(119)
六、离心机的分类(119)
七、离心机的使用和维护(120)
第三节微量加样器(122)
一、微量加样器的一般及分类(122)
二、加样器的选择及使用(123)
三、加样器的维护和校准(129)
参文献(133)
第8章临床pcr检验的质量保证(134)
节概述(134)
一、基本概念(134)
二、质量保证、室内质量控制和室间质量评价之间的关系(136)
三、标本采集、运送、保存及其质量控制(136)
第二节室内质量控制(137)
一、测定前质量控制(137)
二、核酸样本的制备、扩增检测及其质量控制(144)
三、统计学质量控制(146)
第三节室间质量评价(160)
一、室间质量评价的程序设计(161)
二、室间质量评价的局限(164)
参文献(165)
第9章病毒核酸检测的标准物质及其应用(167)
节概述(167)
一、基本概念(167)
二、病毒核酸检测用标准物质的种类和溯源关系(169)
第二节病毒核酸检测用标准物质的制备(170)
一、原材料的选择和分装(171)
二、均匀和稳定(172)
三、定值(174)
四、标准物质的保存(175)
五、核酸检测用标准物质的意义(175)
六、核酸检测用标准物质的展望(176)
参文献(179)
0章甲型肝炎病毒实时荧光pcr检测及临床意义(182)
一、hav的特点(182)
二、havrna实时荧光rtgpcr检测(182)
三、havrna检测的临床意义(185)
参文献(186)
1章乙型肝炎病毒实时荧光pcr检测及临床意义(187)
一、hbv的特点(187)
二、hbvdna实时荧光pcr测定(190)
三、hbv变异的检测及其临床意义(196)
四、hbvcccdna的检测及其临床意义(200)
五、hbv基因型的检测及其临床意义(201)
六、hbvrna的检测及其临床意义(204)
七、hbv全基因组测定及其临床意义(205)
参文献(206)
2章丙型肝炎病毒实时荧光rtgpcr检测及临床意义(210)
一、hcv的形态和基因组结构特点(210)
二、hcv的复制特点(211)
三、hcv的变异特点及基因型(211)
四、hcvrna实时荧光rtgpcr测定(212)
五、hcv基因分型检测及其临床意义(220)
参文献(223)
3章人疫缺陷病毒g1实时荧光rtgpcr检测及临床意义(226)
一、hivg1的特点(226)
二、hivg1rna的实时荧光rtgpcr测定(227)
三、hivg1rna测定的临床意义(234)
参文献(235)
4章人乳头瘤病毒实时荧光pcr检测及临床意义(237)
一、hpv的形态和基因结构特点(237)
二、hpv的体内复制特点(239)
三、病毒的变异特点(239)
四、hpv基因型(240)
五、hpvdna的实时荧光pcr测定(240)
六、hpvdna检测的临床意义(248)
参文献(250)
5章巨细胞病毒实时荧光pcr检测及临床意义(253)
一、人类巨细胞病毒的特点(253)
二、人类巨细胞病毒实时荧光pcr测定(254)
三、巨细胞病毒pcr检测的临床意义(267)
参文献(268)
6章严重急呼吸综合征冠状病毒实时荧光rtgpcr检测及临床意义(269)
一、sarsgcov的特点(269)
二、sarsgcovrna实时荧光rtgpcr检测(270)
三、sarsgcovpcr检测的临床意义(286)
参文献(286)
7章eb病毒实时荧光pcr检测及临床意义(288)
一、eb病毒的特点(288)
二、eb病毒实时荧光pcr测定(289)
三、eb病毒pcr检测的临床意义(294)
参文献(295)
8章流感病毒实时荧光rtgpcr检测及临床意义(296)
一、流感病毒的特点(296)
二、流感病毒的实时荧光rtgpcr测定(298)
三、流感病毒rtgpcr检测的临床意义(320)
参文献(320)
9章风疹病毒实时荧光rtgpcr检测及临床意义(321)
一、风疹病毒的形态和基因组结构及功能特点(321)
二、风疹病毒的复制特点(322)
三、风疹病毒的变异特点及基因型(323)
四、风疹病毒实时荧光rtgpcr测定及其临床意义(323)
参文献(330)
第20章麻疹病毒实时荧光rtgpcr检测及临床意义(332)
一、麻疹病毒的形态和基因组结构及功能特点(332)
二、麻疹病毒的复制特点(334)
三、麻疹病毒的变异特点及基因型(335)
四、麻疹病毒实时荧光rtgpcr测定及其临床意义(335)
参文献(339)
第21章手足病病原体实时荧光rtgpcr检测及临床意义(341)
一、手足病病原体的形态和基因组结构特点(341)
二、手足病病原体复制特点(341)
三、手足病病原体实时荧光rtgpcr测定及其临床意义(342)
四、手足病病原体检测及其临床意义(349)
参文献(349)
第22章埃博拉病毒实时荧光定量rtgpcr检测及临床意义(351)
一、ebov的形态和基因组结构特点(351)
二、ebov的基因分型(352)
三、ebovrna实时荧光rtgpcr测定及其临床意义(352)
参文献(360)
第23章中东呼吸综合征冠状病毒实时荧光rtgpcr检测及临床意义(361)
一、mersgcov的形态和基因组结构特点(361)
二、mersgcov的感染过程(362)
三、mersgcovrna实时荧光rtgpcr测定及其临床意义(363)
参文献(379)
第24章沙眼衣原体实时荧光pcr检测及临床意义(381)
一、沙眼衣原体的形态和基因组结构特点(381)
二、沙眼衣原体的实时荧光pcr测定(381)
三、沙眼衣原体pcr检测的临床意义(391)
参文献(391)
第25章结核杆菌实时荧光pcr检测及临床意义(394)
一、结核杆菌的特点(394)
二、结核杆菌实时荧光pcr检测(395)
三、结核杆菌pcr检测的临床意义(405)
参文献(406)
第26章淋病奈瑟菌实时荧光pcr检测及临床意义(407)
一、淋病奈瑟菌的特点(407)
二、淋病奈瑟菌实时荧光pcr测定(408)
三、淋病奈瑟菌pcr检测的临床意义(418)
参文献(419)
第27章幽门螺杆菌实时荧光pcr检测及临床意义(420)
一、幽门螺杆菌的特点(420)
二、幽门螺杆菌实时荧光pcr测定(421)
三、幽门螺杆菌pcr检测的临床意义(430)
参文献(430)
第28章肺炎支原体实时荧光pcr检测及临床意义(432)
一、肺炎支原体的结构特点(432)
二、肺炎支原体的实时荧光pcr检测(432)
三、肺炎支原体pcr检测的临床意义(437)
参文献(437)
第29章刚地弓形虫实时荧光pcr检测及临床意义(438)
一、刚地弓形虫的特点(438)
二、刚地弓形虫的实时荧光pcr检测(439)
三、刚地弓形虫pcr检测的临床意义(444)
参文献(444)
第30章解脲支原体实时荧光pcr检测及临床意义(446)
一、解脲支原体的特点(446)
二、解脲支原体实时荧光pcr检测(446)
三、解脲支原体pcr检测的临床意义(451)
参文献(452)
第31章egfr基因实时荧光pcr检测及临床意义(453)
一、egfr基因特点及常见突变类型(453)
二、相关靶向药物(454)
三、egfr基因突变实时荧光pcr测定及其临床意义(455)
参文献(463)
第32章kras基因实时荧光pcr检测及临床意义(466)
一、kras基因特点及常见突变类型(466)
二、kras基因突变实时荧光pcr测定及其临床意义(466)
参文献(477)
第33章braf基因突变的实时荧光pcr检测及临床意义(479)
一、braf的基因组结构特点(479)
二、braf基因突变实时荧光pcr测定及其临床意义(480)
参文献(484)
第34章pik3ca基因突变实时荧光pcr检测及临床意义(486)
一、pik3ca的基因结构特点(486)
二、pik3ca基因突变实时荧光pcr测定及其临床意义(487)
参文献(497)