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[美] 奥斯伯 编; 马学军 译 / 科学出版社 / 2005-01 / 精装
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精编分子生物学实验指南
被誉为分子生物学“红宝书”的《精编分子生物学实验指南》(ShortProtocolsinMolecularBiology)是知名度很高、不断更新的《最新分子生物学实验方法汇编》(CurrentProtocolsinMolecularBiology)系列的精简版本,其囊括了《汇编》中所有基本方法及其详细实验步骤,是一本实验室必备的工具书。在上一版推出5年后,新版即将面世。新版对原有内容进行了修订和更新,包括:大肠杆菌、质粒和噬菌体,DNA制备与分析,DNA和RNA的酶促操作,RNA的制备与纯化,重组DNA文库,重组DNA文库的筛选,DNA测序,重组DNA诱变,DNA转染哺乳动物细胞方法的介绍,蛋白质分析,免疫学,DNA-蛋白质相互作用,酿酒酵母,原位杂交与免疫组织化学,聚合酶链式反应,蛋白质表达,蛋白质磷酸化分析等;又新增了生物信息学、蛋白质相互作用、统计分析等新内容。
中译本序前言参编人员致谢第1章大肠杆菌、质粒和噬菌体1.1培养基及常用工具的准备1.2在液体培养基中培养1.3在固体培养基中培养1.4经典细菌遗传学选论1.5质粒图谱1.6质粒DNA的小量制备1.7质粒DNA的大量制备1.8将质粒DNA导入细菌细胞1.9λ噬菌体概述1.10作为克隆载体的λ噬菌体1.11λ噬菌体铺平板产生噬斑1.12培养λ衍生的噬菌体载体1.13从噬菌体裂解液中制备λDNA1.14源于丝状噬菌体的载体1.15M13噬菌体衍生载体的制备和应用第2章DNA的制备和分析2.1A水溶液中DNA的纯化和浓缩2.1B阴离子交换色谱法纯化DNA2.2从哺乳动物组织中制备基因组DNA2.3从植物组织中制备基因组DNA2.4从细菌中制备基因组DNA2.5A琼脂糖凝胶电泳2.5B脉冲场凝胶电泳2.6从琼脂糖凝胶中分离和纯化大的DNA限制性酶切片段2.7用常规的凝胶电泳分离小分子DNA片段2.8DNA的毛细管电泳2.9ASouthern印迹法2.9BDNA的斑点和狭线印迹2.10DNA印迹的杂交分析2.11变性聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化寡核苷酸第3章DNA和RNA的酶学操作3.1限制性内切酶消化DNA3.2用多种酶消化进行DNA作图3.3用限制酶部分消化进行DNA作图3.4核酸操作的常用试剂和放射性同位素3.5依赖于DNA的DNA聚合酶3.6不依赖于模板的DNA聚合酶3.7依赖RNA的DNA聚合酶3.8依赖DNA的RNA聚合酶3.9不依赖DNA的RNA聚合酶3.10磷酸酶和激酶3.11外切核酸酶3.12内切核酸酶3.13核糖核酸酶3.14DNA连接酶3.15RNA连接酶3.16DNA片段的亚克隆3.17聚合酶链式反应构建重组DNA3.18非同位素探针的标记和比色检测3.19非同位素探针的化学发光检测第4章RNA的制备和分析4.1从组织培养细胞中提取细胞质RNA4.2异硫氰酸肌法制备总RNA4.3酚/SDS法制备植物RNA4.4制备细菌RNA4.5poly(A)+RNA的制备4.6用单链DNA探针进行mRNA的S1核酸酶作图分析4.7核酸酶保护试验4.8引物延伸4.9RNA的Northern印迹和狭线杂交分析第5章重组DNA文库的构建5.1基因组DNA文库概述5.2cDNA文库概述5.3噬菌体文库的扩增5.4黏粒和质粒文库的扩增第6章重组DNA文库的筛选6.1噬菌体文库的铺平板和转移6.2黏粒及质粒文库的铺平板和转移6.3应用DNA片段作探针6.4使用合成寡核苷酸作探针6.5噬菌体克隆的纯化6.6黏粒和质粒克隆的纯化6.7在λ噬菌体噬斑中产生的融合蛋白的免疫筛选6.8在杂交选择和翻译后进行的免疫筛选6.9概述筛选YAC文库和分析YAC克隆的策略6.10对分离得到的YAC克隆的分析第7章DNA序列测定7.0DNA测序方法概述7.1DNA测序策略7.2构建用于DNA测序的嵌套式缺失突变体7.3制备DNA测序模板7.4双脱氧法DNA测序7.5化学发光双脱氧DNA测序法7.6用于测序的变性凝胶电泳7.7DNA和蛋白质序列的计算机处理和分析第8章克隆化DNA的诱变8.1无需表型选择的寡核苷酸介导的诱变8.2A用简并寡核苷酸在小段DNA序列中产生大量突变8.2B基因合成:用互为引物的长段寡核苷酸合成目的的序列8.3区域头分区诱变8.4DNA的接头分区诱变8.5利用聚合酶链反应(PCR)的定点诱变第9章DNA导入哺乳动物细胞9.1磷酸钙转染法9.2利用DEAE-葡聚糖的转染9.3电穿孔转染发9.4脂质体介导的转染9.5被转染哺乳动物细胞的选择9.6遗传报道基因系统概述9.7A报道基因活性的同位素分析方法9.7B非同位素分析报道基因活性9.8反转录病毒转导系统概述9.9建立特异的反转录病毒产毒细胞系9.10制备高滴度反转录病毒上清的瞬时转染方法9.11大规模制备和浓缩反转录病毒原液9.12反转录病毒原液中辅助病毒的检测9.13用反转录病毒在体外及体内感染细胞第10章蛋白质分析10.1蛋白浓度测定10.2蛋白质的单向SDS凝胶电泳10.3使用OFarrell系统的双向凝胶电泳10.4凝胶中蛋白的染色10.5免疫印迹和免疫检测10.6凝胶过滤层析10.7离子交换层析10.8免疫亲和层析10.9金属螯和亲和层析10.10肽的反相分离10.11通过表位标签纯化重组蛋白10.12免疫沉淀10.13克隆化基因的体外转录和翻译10.14氨基酸代谢标记10.15分离蛋白质用于微量序列分析第11章免疫学11.1酶与抗体的偶联11.2酶联免疫吸附分析(ELISA)11.3单克隆抗体上清液和腹水的制备11.4单克隆抗体的纯化11.5兔多克隆抗血清的制备11.6从抗血清、腹水或杂交瘤上清液中纯化IgG抗体11.7免疫原性肽的选择11.8抗肽抗体的制备第12章DNA-蛋白质相互作用12.1从哺乳动物细胞中制备核提取物和细胞质提取物12.2DNA结合蛋白在凝胶电泳中的迁移率变动分析12.3甲基化干扰分析法和尿嘧啶干扰分析法12.4DNA酶Ⅰ足迹分析法12.5蛋白质与核酸的紫外交联12.6用生物素/链亲和素亲和系统纯化DNA结合蛋白12.7编码DNA结合蛋白的cDNA的检测、纯化和鉴定12.8用体外合成的蛋白质分析DNA蛋白质相互作用12.9序列特异性DNA结合蛋白的亲和层析纯化12.10PCR辅助结合位点选择确定蛋白质-DNA序列特异性第13章酿酒酵母13.1酵母菌培养基的制备13.2酵母菌的培养与操作13.3酵母菌细胞的诱变13.4酵母菌的克隆载体与基因13.5酵母菌表达载体13.6酵母菌载体与表达产物的检测13.7将DNA导入酵母菌细胞中13.8利用互补作用克隆酵母菌基因13.9从酵母细胞中分离除去质粒13.10克隆化酵母DNA的操作13.11酵母DNA的制备13.12酵母菌RNA的制备13.13制备酵母蛋白抽提物第14章原位杂交和免疫组织化学14.1组织、胚胎及单细胞的固定、包埋及切片14.2冰冻切片14.3细胞RNA的原位杂交14.4杂交探针的检测14.5放射自显影原位杂交玻片的复染和压片固定14.6免疫组织化学法14.7用非同位素进行原位杂交和检测14.8低丰度核酸的检测:原位PCR和杂交第15章聚合酶链式反应(PCR)15.1PCR扩增DNA:标准程序和优化15.2利用PCR产物直接进行DNA序列测定15.3通过PCR方法对微量DNA进行定量分析15.4PCR扩增RNA15.5用于基因组测序及足迹分析的连接介导PCR15.6利用单侧PCR(锚式PCR)进行cDNA扩增15.7PCR产物的分子克隆15.8通过PCR差异显示mRNA第16章蛋白质的表达16.1概述:蛋白质在大肠杆菌中的表达16.2T7噬菌体RNA聚合酶/启动子表达系统16.3融合蛋白载体表达概述16.4融合蛋白的酶解和化学裂解16.5麦芽糖结合蛋白融合蛋白的表达及纯化16.6谷胱甘肽-S-转移酶融合蛋白的表达及纯化16.7硫氧还蛋白融合蛋白的表达和纯化16.8杆状病毒表达系统的概述16.9昆虫细胞培养的保存及重组杆状病毒的产生16.10杆状病毒系统表达和纯化重组蛋白16.11概述:蛋白质在哺乳动物细胞中表达16.12用COS细胞短暂表达蛋白质16.13痘苗病毒表达系统概述16.14细胞系和痘苗病毒贮液的制备16.15重组痘苗病毒的制备16.16重组痘苗病毒及其产物的鉴定16.17用痘苗病毒/T7RNA聚合酶系统表达基因16.18自主调节的四环素控制基因的诱导表达系统第17章蛋白质磷酸化的分析17.1蛋白质磷酸化概述17.2培养细胞用32Pi标记和用于免疫沉淀的细胞裂解物的制备17.3磷酸氨基酸分析17.4分析非标记蛋白质的磷酸化作用17.5酶法检测磷酸化作用17.6用外源性底物分析蛋白激酶17.7研究蛋白磷酸化的渗透策略第18章生物信息学18.1用BLAST程序组进行序列相似性搜索第19章蛋白质相互作用的分析19.1利用相互作用阱/双杂合系统确定相互作用的蛋白质19.2与GST融合蛋白结合的蛋白质的亲和纯化19.3基于噬菌体表达克隆来确认相互作用蛋白质附录附录1试剂和溶液附录2标准测量值和数据附录3生物化学和分子生物学常用技术附录4试剂和设备的供应商附录5参考文献索引
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开播时间:09月02日 10:30